处理小细胞（如PBMC、原代神经元）漏计的问题，核心在于调整其基于深度学习的图像识别参数，有时也需要更换更合适的检测方法。

PBMC等细胞的直径通常只有5-7微米，很容易被仪器误判为碎片。下面的方案可以帮助您逐一排查，解决这个问题。

一、快速检修路径

您可以根据当前情况，选择适合的路径进行排查：

1、调整参数 

如果您刚完成计数并发现漏计，可以直接在结果界面点击 Gating 进行调整。

2、优化样本 (日常)

为了从源头上减少漏判，请检查并优化细胞制备的每一个环节。

3、更换染料 (推荐)

如果台盼蓝结果一直不理想，可以尝试切换到荧光染色（如AO/PI），它能获得更精确的结果。

4、检查维护 (备选)

如果以上方法都无效，则需要检查仪器的硬件清洁和软件状态。

二、方案A：优化图像识别参数（Gating）

这是解决漏计问题Z直接有效的方法。Countess 3的AI计数依赖于预设的参数门限（Gating），优化这些参数能让仪器更精准地识别小细胞。

1、进入Gating界面：完成一次计数后，在结果（Results）屏幕上，点击 Gating 按钮。

2、调整参数滑块：

（1）门限（起始点）：考虑到小细胞的特征，一个有效的起点是将尺寸（Size）、亮度（Brightness）和圆形度（Circularity） 的门限范围调整到Z大。对于Countess 3而言，这意味着将Size的上限滑块拖动到Z大值，例如70；将Brightness的上限滑块拖动到255。这能确保捕获所有细胞。

（2）活细胞/死细胞分别设门：软件允许分别为活细胞和死细胞设置门限。确保它们的参数都已调整，特别是Size和Brightness的范围要足够宽，以包含所有待计数的对象。

（3）微调与观察：调整后，观察屏幕上细胞的圈选情况是否有改善。您可以根据实际情况，再逐步缩小范围以排除非细胞信号。

3、保存为模板：参数优化完毕后，一定要将其保存为一个新的自定义模板（Protocol）。这样，下次处理同类样本时就可以直接调用，确保结果的一致性和重复性。

三、方案B：改善样本制备

高质量的样本是获得准确计数的基础。

1、样本纯化：小细胞容易被碎片信号掩盖。在计数前，尽量去除细胞悬液中的杂质（如细胞碎片）。可以使用密度梯度离心法等手段提纯样本。

2、确保单细胞悬液：成团的细胞会增加识别难度，导致计数偏低。务必通过轻柔吹打等方法确保细胞分散均匀，形成单细胞悬液。

四、方案C：切换到荧光检测模式 (AO/PI双染法)

1、如果反复调整参数后，台盼蓝染色的效果仍不理想，强烈建议您使用 Countess 3 FL 型号的荧光检测功能。

2、荧光染色（如AO/PI法）对细胞的识别是基于DNA染色的，不易受细胞膜轻微变化或碎片干扰，因此特异性和准确性远高于台盼蓝，对PBMC这类小细胞尤其适用。有数据显示，Countess 3 FL能有效完成对小鼠PBMC（可小至5μm）的荧光计数。

五、其他干扰因素

如果以上方法都未能解决问题，可以检查以下外部因素：

1、细胞浓度和焦距：确保细胞浓度在1×10⁴ 到 1×10⁷个细胞/毫升的范围内，并使用自动或手动对焦功能，确保画面中的细胞边缘清晰。

2、清洁与校准：定期清洁仪器的镜头和载物台；在操作前检查是否已安装新的软件版本