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赛默飞countess3细胞计数仪样本中混有磁珠或微载体
2026-05-29 09:36:55 作者: 高思维医疗 582

在样品中混入磁珠(Magnetic Beads)或微载(Microcarriers),确实会对Countess 3系列细胞计数仪的准确性和结果造成严重干扰。主要影响有二:一是仪器会将磁珠误判为细胞,导致计数结果虚高;二是仪器在识别包裹在微载体上的细胞时会出现困难,并可能将微载体碎片误判为细胞。

你的Countess 3具体是明场(Brightfield) 还是FL(荧光)型号?这决定了接下来的操作策略:

明场 (Countess 3):主要通过优化硬件设置来解决,例如使用门控功能(调整阈值)来排除干扰。

FL型号 (Countess 3 FL):除了可用的硬件设置,还可以借助荧光模式来选择性计数,能有效识别并区分。


一、解决方案:明场 (Countess 3)

即使是基础的明场型号,也提供了应对方法:

1、调整“门控”(Gate)设置:这是核心方法。Countess 3的机器学习算法支持根据尺寸(Size)、亮度(Brightness)和圆度(Circularity) 等物理参数圈定目标。通过在“Edit Protocol”界面中移动滑块,可以收紧阈值,过滤掉不符合细胞特征的颗粒。

2、稀释或沉淀分离:如果磁珠/微载体尺寸与细胞差距很大,可以尝试对样品进行稀释,或利用重力/磁力使颗粒短暂沉淀,取上清液计数,以物理方式降低干扰。


二、解决方案:荧光 (Countess 3 FL)

这是更高级且推荐的解决方案,尤其适用于FL型号:

1、使用荧光染料标记:这是鉴别不同颗粒的黄金标准。例如,用FDA或Calcein-AM染活细胞,用PI染死细胞。荧光染料会使细胞发出特定波长光,而有背景荧光干扰的磁珠不会发光,从而被滤除。

2、明场+荧光双重计数:这是FL型号的核心优势,它支持分析多个通道(明场+2个荧光通道),你可以通过对比,精准识别并排除非目标颗粒。


三、总结与操作建议

这是根据你仪器型号的不同情况给出的核心策略:

1、在明场(Countess 3)中:优先使用 “门控”功能调整参数。如果干扰颗粒尺寸与细胞明显不同,可以通过物理方法分离。

2、在FL型号(Countess 3 FL)中:直接使用荧光染料标记配合荧光成像模式,这是Z干净、高效的解决方案。


需要注意的是,无论采用何种方法,都建议在正式实验前进行预实验,验证门控参数或荧光染料的效果,并仔细检查仪器捕获的图像,确认细胞被正确标记而非干扰颗粒。

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