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2026-07-14 10:39:20
作者: 高思维医疗
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比色皿或样品池污染,是导致NanoDrop One测量结果异常(如数据偏差大、重复性差或出现负值)常见的原因之一,大约80%的问题都与此有关。
NanoDrop One主要有两种测量模式:基座(Pedestal)模式(常用)和比色皿(Cuvette)模式(用于稀释样品或动力学研究)。污染的原因和解决方案会有所不同。
一、基座模式(Pedestal)污染
这是绝大多数问题的根源,通常是由于上一次测量的样品残留导致。
1、如何判断基座是否污染?
(1)用无尘擦镜纸(如Kimwipes)和去离子水清洁上下基座并擦干。
(2)在基座上滴加 1-2 μL 去离子水。
(3)放下检测臂,在软件中选择 “Blank”。
(4)读取结果。如果 A260 或 A280 的吸光度值 > 0.04A,则说明基座存在污染。
2、如何清洁基座?
清洁时请遵循由弱到强的原则,并务必使用无尘擦镜纸,普通纸巾会划伤光学表面。
(1)常规清洁(每日/每次测量后):这是Z基本、Z重要的步骤。用无尘纸蘸取少量去离子水,轻轻擦拭上下两个光学基座,然后擦干。每次测量前后都应执行此操作。
(2)深度清洁(针对顽固污渍):如果常规清洁无效,可以尝试以下方法,操作后必须立即用大量去离子水冲洗并擦干。
去除蛋白质或高盐残留:可使用 70% 乙醇 或 0.5M 稀盐酸 (HCl) 擦拭。
去除顽固污染物:可使用 0.5% 次氯酸钠溶液(即稀释10倍的商业漂白水)擦拭。
官网推荐的深度去污:滴加 3 μL 0.5M HCl 在下基座,放下检测臂等待 2-3分钟,然后清洁擦拭。或用 3-5 μL 0.5% 次氯酸钠 等待 30-60秒。
3、基座清洁的“绝对禁区”
(1)禁止使用HF:它会损坏石英光纤。
(2)禁止在仪器上或附近使用喷壶或喷雾瓶:液体可能渗入仪器内部造成永久性损坏。
(3)避免液体长时间浸泡:不要让盐酸、酒精、漂白剂等溶剂在基座密封圈上停留超过1分钟,以免密封圈松动。
(4)禁止触摸或尝试移除基座周围的隔膜:它是固定的。
二、比色皿模式(Cuvette)污染
如果你的NanoDrop One/C配备了比色皿模块,并且在使用比色皿时遇到问题:
1、污染表现:结果不准确、出现异常峰或杂散光
2、清洁方法:
(1)每次测量后,立即用合适的溶剂(如蒸馏水)冲洗比色皿。顽固污渍可用稀盐酸或乙醇浸泡,但避免刮伤透光面。
(2)用柔软的纸或布自上而下擦拭比色皿的透光面,直至无残留。
(3)确保比色皿清洁且干燥后再使用。
3、预防措施:
(1)使用无划痕的比色皿,并避免手指接触透光面(指纹会影响结果)。
(2)可用压缩空气吹掉比色皿架上的灰尘。
(3)及时清理比色皿架内的任何溅出液体。
(4)不使用时保持仪器检测臂关闭。
(5)确保使用的比色皿与仪器兼容(通常是10mm标准光径)。
三、预防与实践
1、日常习惯:将“清洁基座”变成肌肉记忆,每次测量前后都执行。
2、溶剂一致性:务必使用与溶解样品一致的缓冲液进行空白校正。
3、善用智能功能:NanoDrop One的Acclaro? 技术能帮你智能识别样品中的污染物(如蛋白质、苯酚等),善用这个功能可以帮你判断问题是来自基座污染还是样品本身。
4、定期性能验证:建议每6个月使用性能验证试剂盒(PV-1) 对仪器进行一次校准验证。