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miniampPCR实验常用的染料有哪些?
2025-07-07 09:31:58 作者: 高思维医疗 983

在MiniAmp PCR实验(通常指小规模或高通量PCR体系)中,常用的染料主要分为‌核酸凝胶电泳染料‌和‌实时荧光定量PCR染料‌两大类,其选择需兼顾灵敏度和安全性。以下是具体分类及特性:


一、核酸凝胶电泳染色染料(用于PCR产物检测)

用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的可视化:


1、SYBR系列(如SYBR Green I)

与双链DNA特异性结合后荧光增强,灵敏度高;

需注意高浓度可能抑制PCR反应。


EvaGreen

饱和型染料,可在高浓度下使用而不抑制扩增,适合高精度定量和熔解曲线分析。

GoldView

低毒性替代EB的染料,激发后呈绿色荧光

溴化乙锭(EB)

经典染料,但具强致癌性,操作需严格防护,逐渐被淘汰。


二、实时荧光定量PCR染料(qPCR)

用于监测PCR扩增过程的荧光信号累积:

1、SYBR Green I

原理:嵌入DNA双链小沟,荧光信号强度与产物量正相关;

优点:通用性强、成本低;

缺点:易受引物二聚体干扰,需熔解曲线验证特异性。

2、TaqMan探针

原理:5'端荧光基团与3'端淬灭基团分离后发光,特异性高。

优势:适用于SNP检测及多重PCR,背景噪音低。

3、分子信标(Molecular Beacons)

茎环结构探针,靶序列结合后发荧光,适合突变检测。


三、特殊场景染料

1、嵌合型染料(如Syto82、Syto9)对扩增抑制小,灵敏度高。

2、比色染料(如HNB)通过颜色变化判断结果,无需仪器。


四、总结

1、泳检测:推荐SYBR Safe或GoldView(安全性高)。

2、qPCR检测:SYBR Green I(经济通用)或EvaGreen(高稳定性)。

3、特殊应用:CF®染料适用于荧光标记探针合成。

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