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2025-10-15 09:16:32
作者: 高思维医疗
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QuantStudio 3 在设计上能够进行长时间的实验,例如在运行标准96孔板时,一个典型的qPCR程序本身就需要1.5到2.5小时。仪器本身具备连续运行24小时甚至更久的硬件能力。
然而,能否顺利实现24小时连续运行,关键在于实验设计、样品和试剂稳定性以及无人值守的风险管理。以下是详细的解释和注意事项:
一、支持24小时运行的理由
1、硬件设计:仪器的加热块、光学检测系统和控制软件都支持长时间运行。您可以轻松设置一个循环数多、退火/延伸时间长的程序,总时长超过24小时。
2、软件支持:QuantStudio Design and Analysis 软件允许您设置并运行长达数天的实验程序。
二、实现24小时连续运行的关键前提与注意事项
1、反应体系蒸发问题(Z关键!)
必须使用光学盖膜或封板膜:绝对不能直接使用普通的板盖。需要使用专门的热封膜(如 MicroAmp™ Optical Sealing Film)或光学透明的粘性封板膜,并用相应的封板器将其紧密密封,防止在长时间高温循环中液体蒸发,导致反应失败和仪器污染。
验证密封性:确保封膜没有褶皱或未封紧的区域。
2、试剂和酶的稳定性
使用长效酶:普通的Taq酶在长时间高温循环下可能会失活。如果您计划运行一个非常长的程序(例如超过3-4小时),强烈建议使用为“长片段PCR”或“长时间扩增”设计的特殊酶 mix,这些酶具有更好的热稳定性。
Mix的稳定性:确保您使用的预混液(Master Mix)制造商没有标明不适用于超长运行时间。
3、实验设计的合理性
循环数:通常40个循环已经足够检测绝大多数模板。设置过高的循环数(如60-80循环)不仅不必要,还可能增加背景噪音和蒸发风险。请根据您的模板浓度合理设置循环数。
程序步骤时间:延长退火/延伸时间会增加总运行时间。请确认您的扩增片段长度是否需要这么长的延伸时间。
4、无人值守的风险
电力保障:确保实验室供电稳定,Z好有UPS(不间断电源)支持,防止意外断电导致实验中断和数据丢失。
仪器状态:在离开前,确认仪器运行正常,没有报错信息。
环境温度:确保仪器周围通风良好,环境温度不会过高。
三、总结与建议
1、可以做到:QuantStudio 3 在技术上能够单次连续运行24小时。
2、不推荐常规化:除非有特殊实验需求(如使用特殊的长片段酶),否则不建议常规设计单次长达24小时的qPCR程序。更好的做法是优化实验方案,缩短运行时间,或采用分批上样的间歇式运行。
3、如果必须进行:
严格密封:使用高质量的光学密封膜和封板器。
选择稳定试剂:确认并使用热稳定性更高的酶。
进行预实验:先用少量样本进行一次长时间运行的预实验,验证扩增效率和结果是否可接受。
做好风险管理:确保电力稳定,并告知实验室相关人员。
4、总而言之,将QuantStudio 3用于24小时连续运行在技术上是可行的,但成功与否高度依赖于您对蒸发控制和试剂稳定性的管理。 在尝试之前,请务必仔细评估这些风险。