Eppendorf 5425是一款非常经典且高性能的微量高速冷冻离心机，其Z大转速可达14,700 rpm（约21,130 x g），广泛应用于分子生物学、细胞生物学、生物化学和临床诊断等领域。它的主要特点是体积紧凑、运行安静、制冷快速且控温精准。以下是一些典型的使用案例介绍，您可以根据这些案例来理解它适合在哪些实验步骤中发挥作用。

一、艾本德5425台式微量离心机分子生物学实验

这是5425Z核心的应用领域。

1、质粒DNA提取

（1）步骤：在碱裂解法提取质粒的多个步骤中都需要离心。

（2）具体操作：

菌体收集：取1-2 mL过夜培养的菌液，使用1.5 mL或2.0 mL离心管，在8,000 - 12,000 rpm条件下离心1分钟，弃上清，收集菌体。

沉淀杂质：在加入溶液II和溶液III后，会产生蛋白质和基因组DNA的沉淀。此时需要12,000 - 14,000 rpm离心5-10分钟，将沉淀紧密压在管底，以便将上清液（含质粒DNA）转移到新的离心管中。

沉淀DNA：在上清中加入异丙醇或乙醇沉淀质粒DNA时，需要在4°C预冷条件下，以Z高转速（如14,000 rpm）离心15-30分钟，以确保微量的DNA能被完全沉淀下来。

（3）为何需要5425：步骤多，需要频繁离心；沉淀DNA时需要高速和冷冻功能以防止样品过热并提高沉淀效率。

2、RNA/DNA纯化

（1）步骤：使用商品化试剂盒（如Qiagen, Thermo Fisher的系列产品）进行核酸纯化时。

（2）具体操作：在结合、洗涤步骤中，通常需要短时高速离心（如12,000 rpm， 30-60秒），将液体甩过纯化柱。Z后一步洗脱时，为了Z大化回收率，有时也会进行短暂高速离心。

（3）为何需要5425：快速、高效的离心能确保液体完全通过膜，避免残留，保证纯化和回收效率。

3、PCR产物纯化、酶切反应后处理

（1）步骤：在PCR反应后或酶切反应后，可能需要去除多余的引物、dNTPs或酶等。

（2）具体操作：使用纯化试剂盒时，离心步骤与上述RNA/DNA纯化类似。简单沉淀蛋白质时，可能需要4°C， 14,000 rpm离心10分钟。

二、艾本德5425R冷冻离心机蛋白组学与生物化学实验

1、细胞/组织裂解物中沉淀蛋白质或细胞碎片

（1）步骤：在提取总蛋白时，需要将细胞裂解液中的不溶物（如细胞膜、核酸等）去除。

（2）具体操作：将裂解后的样品在4°C条件下，以12,000 - 14,000 rpm离心15-20分钟。上清即为可溶性总蛋白，沉淀弃去。

（3）为何需要5425：低温控制至关重要，可以防止蛋白质在离心过程中降解或变性。5425的快速制冷能迅速将转子降温至4°C。

2、免疫沉淀/共沉淀后的珠子清洗

（1）步骤：在免疫沉淀实验中，需要多次洗涤结合了抗原-抗体复合物的Protein A/G珠子。

（2）具体操作：每次加入洗涤缓冲液后，需要进行短时低速离心（如3,000 - 5,000 rpm， 30秒），使珠子沉降到管底，然后小心吸弃上清。

（3）为何需要5425：虽然转速不高，但需要离心机运行平稳，防止将松散的珠子沉淀重新打散。5425的加速和减速曲线平滑，非常适合此类操作。

三、常规细胞培养

1、细胞传代培养

（1）步骤：消化下来的细胞需要离心收集并重悬。

（2）具体操作：将含有细胞的培养基转入15 mL锥形离心管（需配用15 mL转接器），在室温或4°C条件下，以1,000 - 1,500 rpm离心5分钟，使细胞温和地沉淀下来，弃去上清（含胰酶等），加入新鲜培养基重悬。

（3）为何需要5425：对于贴壁细胞，离心力不能过大，否则会损伤细胞。5425可以精确设置较低的转速，并且运行非常平稳，对细胞友好。

2、收集细胞沉淀用于后续分析

（1）步骤：需要提取细胞内的核酸或蛋白时，先离心收集细胞。

（3）具体操作：取少量细胞悬液，使用1.5/2.0 mL离心管，在4°C条件下，3,000 - 5,000 rpm离心5分钟，弃上清，得到细胞沉淀。

四、总结与关键特性

1、通过以上案例，我们可以总结出Eppendorf 5425离心机的核心优势：

2、高速与高离心力：能应对绝大多数分子生物学实验的沉淀需求。

3、精确的温控：制冷功能是保证对温度样品（如RNA、蛋白质）活性的关键。

4、多功能性与兼容性：通过搭配不同的转子和适配器，可以处理从0.2 mL PCR管到15 mL锥形离心管的各种规格样品。

5、操作便捷与人性化设计：快速的升/降速、Short-Spin功能、安静的运行噪音，都大大提升了实验效率和舒适度。