伯乐S1000™梯度PCR仪是一款经典且性能稳定的仪器。其操作核心在于理解其物理旋钮和显示屏的交互方式，与现代全触屏PCR仪有所不同。以下为您提供详细的操作步骤、关键注意事项和实用技巧。

一、伯乐S1000梯度PCR仪操作前准备

1、仪器检查：

确认电源线连接牢固，电源开关位于“OFF”状态（位于仪器背面）。

打开仪器顶盖，检查样品槽是否干净，无碎屑或残留物。

2、编写程序：

在电脑或实验记录本上预先写好完整的PCR程序，包括：

预变性（通常94-95℃， 2-5分钟）

循环阶段（变性、退火、延伸的温度和时间，循环次数）

梯度退火温度（如果需要）：确定梯度范围和实验组数（S1000的梯度块是横向的，共12列）。

Z终延伸（通常72℃， 5-10分钟）

保温（通常4℃或10℃， ∞）

3、样品准备：

在冰上配制PCR反应体系，并分装到0.2ml的薄壁PCR管中。

盖紧管盖，防止加热过程中液体蒸发和凝结。

短暂离心收集液体至管底。

二、伯乐S1000梯度PCR仪操作步骤

1、开机与放置样品

（1）接通电源，打开仪器背面的主电源开关。

（2）按下仪器正面左下角的银色按钮，打开顶盖。

（3）将装有样品的PCR管垂直、紧密地放入热槽中。如果样品数少，尽量对称放置以获得均匀的热效应。

（4）务必盖紧顶盖。

2、创建或调用程序

（1）按 RUN/ENTER 键进入主菜单。

（2）旋转旋钮，使屏幕光标选择 “PROG”（程序）。

（3）按 RUN/ENTER 确认。

新建程序：旋转旋钮选择 “NEW”，按 RUN/ENTER。

调用旧程序：旋转旋钮选择已存储的程序号（1-9），按 RUN/ENTER。

3、设置程序参数

（1）屏幕显示 “STEP 1”。旋转旋钮设置第一步的温度，按 RUN/ENTER 确认。

（2）旋转旋钮设置第一步的时间（分钟:秒），按 RUN/ENTER 确认。仪器会自动进入 “STEP 2”。

（3）重复以上步骤，设置所有循环步骤（变性、退火、延伸）。对于循环内的步骤，系统会提示您设置循环次数。

（4）设置Z后的保温步骤（通常设为4℃）。时间可设为“∞”或一个较长的时间。

4、设置梯度（关键步骤）

（1）在设置退火步骤的温度时，按 GRAD 键，屏幕会显示梯度设置界面。

（2）设置上限温度：屏幕通常先指示“Grad Top”。旋转旋钮设置梯度一侧的Z高温度，按 RUN/ENTER 确认。

（3）设置下限温度：屏幕指示变为“Grad Bot”。旋转旋钮设置梯度另一侧的Z低温度，按 RUN/ENTER 确认。

（4）重要：仪器会自动在左右两端的样品列之间生成一个线性的温度梯度。中间各列的温度是自动计算生成的。请将您的样品按照实验设计放入对应的列中。

（5）再次按 GRAD 键退出梯度设置模式，继续设置该退火步骤的时间。

5、保存与运行程序

（1）所有步骤设置完毕后，按 RUN/ENTER。

（2）旋转旋钮选择 “SAVE”，按 RUN/ENTER。

（3）旋转旋钮为程序选择一个编号（1-9），按 RUN/ENTER 保存。

（4）返回主界面或程序就绪界面后，按下 START/STOP 键，仪器开始运行。您会听到蜂鸣器提示，并看到状态变为“RUN”。

6、运行结束

（1）程序完成后，蜂鸣器会响起，状态显示为“IDLE”（空闲）并停留在Z终保温温度。

（2）按 START/STOP 键可以停止蜂鸣。

（3）打开顶盖，尽快取出样品进行后续分析或置于冰上。

三、关键注意事项

1、梯度方向：伯乐S1000的梯度是横向的（从左到右）。请确保您清楚知道从左到右每一列对应的实际温度，并在放置样品管和记录时对应好。

2、管盖紧闭：这是防止蒸发和污染的Z重要步骤。

3、热盖温度：S1000的热盖温度通常是固定的（~105℃），用于防止管盖内冷凝，无需手动设置。确保热盖清洁且与管盖接触良好。

4、程序验证：在按START前，务必通过旋钮浏览一遍已设置的程序，确认所有温度、时间和梯度设置无误。

5、紧急停止：运行过程中如需停止，直接按 START/STOP 键，仪器会停止加热并进入空闲状态。

四、常见问题

1、屏幕不亮/无反应：检查背面的主电源开关和电源线是否接通。

2、温度不稳定或报错：可能是仪器需要校准或存在硬件故障，请叫维修工程师。

3、梯度效果不理想：检查样品管是否对称放置、体积是否一致、热盖是否盖紧。

建议：首次使用时，强烈建议用水或模拟反应体系进行一次全流程操作演练，并记录下梯度各列的实际温度（可用热电偶温度计测量），以熟悉流程和验证仪器状态。