使用赛默飞Simpliamp梯度PCR仪进行实验时所需的耗材和试剂。这是一套标准而完整的清单，您可以根据您的具体实验方案进行选择和调整。

一、赛默飞Simpliamp梯度PCR仪核心耗材

这些是直接放入PCR仪的消耗品。

1、PCR管或PCR板

（1）类型：必须使用透明、无裙边或半裙边的96孔PCR板或0.2ml单管/8联管。Simpliamp的热盖是平板式设计，与平盖的板/管才能紧密接触，确保热封效果。

（2）材质：推荐使用高质量、超薄壁的聚丙烯管/板，以确保热传导效率和温度准确性。

（3）重要提示：切勿使用有高高凸起管盖的PCR管（如某些品牌的单管），否则热盖无法压紧，会导致反应体系蒸发和实验失败。

2、封板膜或管盖

（1）对于PCR板：使用光学透明的粘性封板膜，确保密封严实，防止蒸发和交叉污染。

（2）对于单管/八联管：确保管盖盖紧。八联管通常有配套的平盖。

二、赛默飞Simpliamp梯度PCR仪核心试剂

这些是构成PCR反应体系的化学成分。

1、PCR主混合物

（1）预混液：常用且方便的是 2× PCR Master Mix。它已经包含了Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl₂以及优化的缓冲液。您只需加入模板、引物和水即可。赛默飞自家的 Platinum™ SuperFi™ PCR Master Mix 或 DreamTaq™ Hot Start PCR Master Mix 都是兼容性很好的选择。

（2）单独组分：也可以选择单独购买：热启动Taq DNA聚合酶、10× PCR缓冲液、dNTP混合物、MgCl₂溶液。

2、引物

上游引物和下游引物：针对您目标基因特异性设计的寡核苷酸引物。通常使用浓度为10 μM的工作液。

3、模板DNA

可以是基因组DNA、cDNA、质粒DNA等，浓度和纯度需根据实验优化。

4、无菌无核酸酶水

用于补足反应体系体积。至关重要，必须确保无菌且无核酸酶污染，以防止降解和假阴性结果。

三、实验流程简要总结（以使用预混液为例）

1、在冰上配制反应体系（以下为25μL体系的常见比例）：

2× PCR Master Mix：12.5 μL

上游引物（10 μM）：1.0 μL

下游引物（10 μM）：1.0 μL

模板DNA：X μL（通常10pg - 100ng，需优化）

无菌无核酸酶水：补足至 25 μL

2、轻柔混匀并短暂离心，确保所有液体收集在管底。

3、将PCR管/板放入Simpliamp仪器中，确保放置平稳。

4、在仪器控制面板或配套软件上设置程序：

预变性：94-98°C，30秒 - 2分钟。

循环（30-40次）：

变性：94-98°C，10-30秒。

退火：在此设置梯度温度（例如50°C - 65°C），这是Simpliamp梯度功能的关键应用，用于快速确定退火温度。15-60秒。

延伸：72°C（对于Taq酶），每1kb延伸30-60秒。5-10分钟。保温：4-10°C。

5、启动运行。

6、程序结束后，取出产物，进行后续的电泳或分析。

梯度功能：Simpliamp的核心优势是可以在同一块板/同一批管子上同时测试多个退火温度。在设置时，您只需要在退火步骤设置一个温度范围，仪器会自动在加热块的不同列生成线性梯度。放置样品时，请根据仪器说明书或屏幕提示，将样品放在对应的列上。

清洁与维护：定期用70%乙醇擦拭热盖和样品槽，防止污染。