赛默飞世尔科技（Thermo Fisher Scientific）的 ProFlex? 3x32 PCR 系统 是一款高度灵活、可配置的梯度PCR仪（支持三个独立温区，每个温区可放置不同的模块，如标准96孔、快速96孔、双槽384孔等）。根据您的实验需求，运行该系统通常需要以下耗材和试剂：

一、赛默飞ProFlex 3x32PCR系统核心耗材

1、PCR板或管：

（1）与模块匹配的耗材至关重要。系统支持多种模块，请根据您使用的模块类型选择：

96孔模块：使用标准的 0.2ml 8联排管（PCR条管） 或 96孔PCR板。

384孔模块：使用专用的 384孔PCR板。

（2）材质：推荐使用高质量、薄壁、光学透明的聚丙烯材质，以确保热传导和荧光检测兼容性（如果后续需要进行qPCR，但ProFlex本身是普通PCR仪）。

2、封盖材料：

（1）对于PCR板：

光学透明封板膜：密封性好，兼容后续的荧光检测（如在其他仪器上做qPCR分析）。

热封膜：使用热封仪密封，是防止蒸发和交叉污染可靠的方式之一。

压敏型封板膜（可撕式）：使用方便，但需确保按压紧密。

（2）对于8联排管：

平盖或凸盖：根据PCR仪热盖类型选择。ProFlex使用自动压力热盖，能适应不同高度的管盖，但需确保所有管盖高度基本一致。

管盖通常随管一起购买。

二、赛默飞ProFlex 3x32梯度PCR系统核心试剂

1、PCR主反应混合物：

（1）预混液：推荐使用 Taq DNA聚合酶预混反应液（2× PCR Master Mix），其中已包含Taq酶、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液等。使用方便，重复性好。例如，赛默飞的 TaqMan® Fast Advanced Master Mix（用于探针法qPCR的预混液，也可用于普通PCR）或 Platinum™ Taq DNA Polymerase 系列。

（2）或自行配制：需要单独购买：

耐热DNA聚合酶（如Taq酶）

10× PCR反应缓冲液

氯化镁

dNTP混合物

2、模板DNA：您要扩增的目标DNA，浓度和纯度需合适。

3、引物：针对目标序列特异设计的上游和下游引物，通常以干粉或储存液形式提供，使用时稀释到工作浓度。

4、无核酸酶水：用于补足反应体积，并稀释模板和引物。务必使用无核酸酶的水或TE缓冲液，以避免DNA降解。

三、可选/辅助试剂与耗材

1、阳性对照：含有已知目标序列的DNA模板，用于验证PCR体系是否正常工作。

2、阴性对照：

（1）无模板对照：用无核酸酶水代替模板DNA，用于检测试剂或环境是否存在DNA污染。

（2）无引物对照：用等体积水代替引物，用于检测模板是否有残留杂质。

3、染料（用于普通PCR终点检测）：

（1）上样染料：如果PCR产物后续需要进行琼脂糖凝胶电泳，可在反应完成后加入或在配制预混液时加入。

（2）在凝胶电泳中显影的染料：如溴化乙锭、SYBR® Safe等更安全的替代品。

4、用于梯度PCR优化的试剂：当您使用梯度功能寻找退火温度时，可能需要准备多管/多孔的相同反应体系，以便在不同温度下同时测试。

四、重要操作提示：

1、模块与耗材匹配：在开机前，务必确认仪器中安装的模块类型（可从仪器触摸屏的“模块设置”中查看），并选择与匹配的耗材。错误的耗材会导致热盖压力不均、热传导不佳甚至损坏仪器。

2、建立和保存程序：充分利用ProFlex的三区独立梯度功能。您可以为每个区设置独立的温度程序，包括在退火步骤设置温度梯度（例如，A区设置为58°C，B区为60°C，C区为62°C；或每个区内也可设置梯度）。程序可以在触摸屏上轻松创建和保存。

3、防止污染：操作时务必佩戴手套，并在专门的超净工作台或干净区域配制反应体系，与加模板DNA的区域分开。

4、体系体积：确保反应体系体积在推荐范围内（通常20-50μl），并遵循PCR板/管的体积要求。

总结清单：您每次实验前需要准备的是：

匹配模块的PCR板/管 + 密封膜/盖 + PCR预混液 + 模板DNA + 引物 + 无核酸酶水 + 对照品 + 移液用品。