即可享受高思维平台:“特价促销产品价格”,“现货供应产品价格”,“下载产品相关资料”,“享10分钟内响应,8小时出具解决方案”等服务。
2026-01-07 08:55:36
作者: 高思维医疗
532
伯乐(Bio-Rad)的 Mini-PROTEAN Tetra 小型垂直电泳槽是一款非常经典的用于蛋白质或核酸(需适配制胶板)SDS-PAGE或Native-PAGE的实验室设备。其标准使用参数如下:
一、伯乐Mini-PROTEAN Tetra 小型垂直电泳槽核心规格
1、制胶板尺寸: 标准板为 10.1 cm x 8.2 cm (H x W),短板为 7.3 cm x 8.2 cm (H x W)。
2、凝胶数量: 一次可同时运行 2 块 凝胶(标准板或短板)。
3、样品孔数: 取决于梳子规格。常用有 10 孔、15 孔 和 厚度的 1.0 mm 或 1.5 mm。
4、10 孔梳: 适合标准上样量,孔较大。
5、15 孔梳: 适合更多样品,节省凝胶,但孔容量较小。
6、上样量: 与凝胶厚度和梳子有关。
7、1.0 mm 凝胶,10 孔: 每孔MAX 约 20-25 µL。
8、1.5 mm 凝胶,10 孔: 每孔MAX 约 30-40 µL。
二、伯乐Mini-PROTEAN Tetra 小型垂直电泳槽标准电泳参数(以SDS-PAGE为例)
1、凝胶制备(以1.0 mm厚,10%分离胶为例)
(1)分离胶浓度: 根据目标蛋白分子量选择(通常 8%-15%)。
(2)浓缩胶浓度: 通常为 4% 或 5%。
(3)缓冲系统: 通常使用 Tris-Glycine 缓冲系统(Laemmli系统)。
2、电泳缓冲液(Running Buffer)
(1)常用配方: 25 mM Tris, 192 mM Glycine, 0.1% (w/v) SDS, pH ~8.3。
(2)内槽缓冲液用量: 每块凝胶需要约 125 mL(标准板)或 75 mL(短板)。电泳槽内槽总容量约为 250 mL。
(3)外槽缓冲液用量: 电泳槽外槽(下槽)总容量约为 1.5 L,但运行时通常加入约 800 mL - 1 L 即可覆盖电极。
3、电泳条件
(1)电压/电流: 常规采用 恒定电压 模式。
(2)浓缩阶段(样品在浓缩胶中): 80-100 V, 运行约 20-30 分钟,直到染料线进入分离胶并成一条直线。
(3)分离阶段(样品在分离胶中): 120-150 V, 运行直至溴酚蓝(前沿指示剂)迁移至凝胶底部(约 60-90 分钟,取决于凝胶浓度和长度)。
(4)功率/时间: 总电泳时间通常为 1-1.5 小时。凝胶长度和电压会影响时间。
(5)短板凝胶: 可以在 150-200 V 下更快完成,约 30-45 分钟。
(6)温度控制: 长时间高压电泳会产生大量热,建议在 冷室(4°C) 中运行或使用 循环冷却水系统(Mini-PROTEAN Tetra 电泳槽有配套的冷却芯),以确保条带平直并防止蛋白热变性。
三、关键注意事项
1、组装: 确保玻璃板、垫片和梳子组装严密,无泄漏。制胶架(Casting Frame) 要卡紧。
2、缓冲液量:
内槽: 加满至溢出,确保上下连通且覆盖上样孔。
外槽: 液面需淹没内槽下部的金属电极/铂丝。
3、上样: 样品需与适量上样缓冲液混合并煮沸变性(SDS-PAGE)。用微量进样器缓慢加入孔底部,避免冲出。
4、电源连接: 正确连接电极(红对红,黑对黑),即红色接头对应内槽(上槽,阴极),黑色接头对应外槽(下槽,阳极)。
5、安全: 电泳开始前确认盖好安全盖。运行中勿触摸缓冲液或打开盖子。
6、清洁: 使用后及时用去离子水冲洗所有部件,特别是电极和垫圈区域,防止盐结晶腐蚀。
四、对核酸电泳
1、该电泳槽主要用于蛋白质电泳。
2、如需用于DNA/RNA琼脂糖凝胶电泳,需要额外购买专用的制胶托盘和梳子(如Bio-Rad的 #1658008 制胶盘组件)。
3、此时缓冲液改为 TAE 或 TBE,并采用恒压模式(如 5-10 V/cm 凝胶长度)。
五、总结
1、凝胶类型: 蛋白质SDS-PAGE(主流)
2、凝胶尺寸: 标准板(10.1 cm高)或短板(7.3 cm高)
3、运行数量: 2块
4、上样量: 1.0mm胶每孔约20-25 µL(10孔梳)
5、缓冲液: Tris-Glycine-SDS,内槽~250 mL,外槽~1 L
6、电压: 浓缩胶 80-100 V,分离胶 120-150 V(标准板)
7、时间: 1 - 1.5 小时(标准板)
8、温度: 建议冷却条件下运行
技术参数仍需根据您的具体实验条件(如蛋白大小、凝胶浓度、缓冲液新鲜度等)进行微调。使用前参考随附的官网说明书。