伯乐Mini-PROTEAN® Tetra电泳槽（也称为“四板电泳槽”）是一款非常经典且常用的垂直电泳槽，适用于SDS-PAGE蛋白电泳。其核心特点是可同时运行多达4块小型胶（迷你胶），适合高通量筛选。以下是详细的操作方法和步骤指南：

一、伯乐Mini-PROTEAN® Tetra电泳槽实验前准备

1、试剂与材料：

电泳槽主体（包括上槽、下槽、绿色电极盖、夹子、红/黑电极线）

玻璃板、短板、1.0/1.5mm厚垫片、梳子

制胶架和制胶框

配制好的分离胶和浓缩胶溶液

电泳缓冲液（如1x Tris-Glycine-SDS缓冲液）

蛋白样品、上样缓冲液、Marker

移液器及上样吸头

电源

2、安全：佩戴手套和护目镜。

二、伯乐Mini-PROTEAN® Tetra电泳槽灌胶与制胶

1、组装制胶三明治：

（1）将短板（短板） 和带绿边的长板分别与相应厚度的垫片对齐。

（2）将短板（内板）放入制胶架的卡槽内，光滑面朝前。

（3）将长板（外板，绿边朝上）压在短板和垫片上，形成“三明治”。确保底部对齐。

（4）将整个“三明治”卡进制胶架的弹簧夹中，锁紧。可以同时制作多个。

2、灌制分离胶：

（1）按照配方配制分离胶，混匀后迅速用移液器或加样枪沿玻璃板一角灌入，避免产生气泡。

（2）灌至适当高度（通常为玻璃板的2/3至3/4处）。

（3）立即在胶面上轻轻覆盖一层去离子水、异丙醇或水饱和正丁醇，以压平胶面并隔绝空气。

（4）静置15-30分钟，待分离胶凝固（可见清晰折光线）。

3、灌制浓缩胶：

（1）倒掉上层封胶液体，用滤纸吸干残留液滴。

（2）配制浓缩胶，混匀后灌满剩余空间。

（3）立即插入合适的梳子，避免产生气泡。

（4）静置15-20分钟，待浓缩胶凝固。

三、电泳槽组装与上样

1、安装胶块：

（1）胶凝固后，从制胶架上取下胶“三明治”。

（2）打开电泳槽的上槽（缓冲液槽） ，将其内侧向下放置。

（3）将胶“三明治”的短板（内板）面向内侧，绿边紧贴上槽的橡胶垫，卡入上槽的卡槽中。

（4）每块胶的两侧分别用夹子夹紧固定。可安装1-4块胶。

（5）将装好胶的上槽放入下槽（接地槽） 中。

2、加入电泳缓冲液：

（1）在下槽中加入足量的电泳缓冲液，液面应达到或略超过上槽底部的金属丝。

（2）在上槽中加入电泳缓冲液，液面应超过上槽的矮边。

3、拔梳与上样：

（1）双手垂直向上轻轻拔出梳子。

（2）用微量移液器吸取蛋白样品和Marker，穿过上槽缓冲液，小心加入加样孔底部。避免交叉污染和溢出。

四、电泳运行

1、连接电源：

（1）盖上绿色电极盖，确保盖子上的电极与上槽的电极接触良好。

（2）将电极盖上的红色插头（正极，对应上槽） 和黑色插头（负极，对应下槽） 分别连接到电泳电源的对应输出口。

（3）注意：红色对红色，黑色对黑色。电流方向是从上槽（负极，黑色）流向下槽（正极，红色），蛋白带负电向下迁移。

2、设置电泳参数并运行：

（1）打开电源。

（2）设置电泳条件。对于标准SDS-PAGE，通常采用：

（3）恒压模式：初始浓缩阶段80-100V，待样品进入分离胶并看到Marker条带分开后，提高至120-150V。

（4）恒压模式：直接120V，约60-90分钟跑完。

（5）恒流模式：如20-30mA/胶，适用于多块胶同时运行。

五、电泳后处理

1、关闭电源，拔掉电极线。

2、拆卸：倒掉或回收电泳缓冲液。取下夹子，小心撬开玻璃板，取出凝胶。

3、下游应用：将凝胶进行后续的考马斯亮蓝染色、银染或 Western Blot 转膜。

六、关键注意事项与技巧

1、防漏：确保玻璃板洁净，垫片放正，夹子夹紧，是防止灌胶和电泳时漏液的关键。

2、气泡：灌胶和插梳时避免产生气泡，否则会影响加样孔形状和电泳条带。

3、方向与电极：务必记住短板在内侧，绿边朝上。电极连接错误会导致样品跑出胶外。

4、缓冲液量：下槽缓冲液一定要没过上槽底部的金属丝，否则电路不通。

5、清洁：使用后用去离子水清洗所有部件，特别是电极和橡胶垫处，防止盐结晶腐蚀。

6、安全：在接通电源或槽内有缓冲液时，不要触碰电极或缓冲液，以防触电。