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实验室电泳技术的分类
2026-01-26 09:21:51 作者: 高思维医疗 717

实验室电泳技术种类繁多,主要根据支持介质、分离原理和设备形式进行分类。以下是常见的分类体系:


一、按支持介质分类

传统的分类方式,根据分离所用基质的不同进行划分。

1、琼脂糖凝胶电泳

(1)原理:利用琼脂糖的多孔网状结构分离生物大分子。

(2)特点:

操作简便,成本低,常用于核酸(DNA/RNA)分析。

分辨率相对较低,适合分离100 bp至数十kb的核酸片段。

常用染料:溴化乙锭(EB)、GelRed、SYBR系列等。

2、聚丙烯酰胺凝胶电泳

(1)原理:通过丙烯酰胺单体聚合形成孔径更小、更均匀的凝胶网络。

(2)特点:

分辨率高,适用于蛋白质、小片段核酸(<500 bp)及DNA测序。

可根据需要调整凝胶浓度,控制孔径大小。

(3)分为:

非变性PAGE:保持蛋白质天然结构和活性。

SDS-PAGE:加入SDS使蛋白质变性,分离仅基于分子量大小。

变性PAGE(如尿素-PAGE):用于RNA或单链DNA分析。

3、淀粉凝胶电泳

历史较久,现已较少使用,曾用于蛋白质和同工酶分析。


二、按分离原理分类

根据分子在电场中分离的驱动力和机制划分。

1、区带电泳

在均匀介质中,样品中各组分迁移速率不同,形成分离的区带。

大多数常规凝胶电泳(琼脂糖、PAGE)属于此类。

2、等电聚焦

(1)原理:在具有pH梯度的介质(如凝胶)中,带电分子(主要是蛋白质)迁移至其等电点位置时净电荷为零而停止移动。

(2)特点:

分辨率高,能区分等电点差异小于0.01 pH单位的蛋白质。

常用于蛋白质纯化、鉴定及蛋白质组学研究。

3、双向电泳

(1)原理:结合两种不同分离原理进行两次垂直方向的电泳。

(2)常见组合:一向为等电聚焦,第二向为SDS-PAGE。

(3)应用:用于复杂蛋白质混合物的高分辨率分离,是蛋白质组学的核心技术之一。

4、免疫电泳

(1)将电泳与抗原-抗体反应相结合,用于检测和分析特定蛋白质。

(2)如火箭免疫电泳、对流免疫电泳等。


三、按设备形式与自动化程度分类

1、平板电泳

(1)凝胶铺于水平或垂直玻璃板/塑料板之间。

(2)水平电泳:常用于琼脂糖凝胶(核酸)。

(3)垂直电泳:常用于聚丙烯酰胺凝胶(蛋白质)。

2、毛细管电泳

(1)原理:在极细的毛细管(内径25-100 μm)中,以高压电场驱动样品分离。

(2)优点:

自动化程度高,样品用量少(纳升级),分离速度快,分辨率高。

(3)常见模式:

毛细管区带电泳

毛细管凝胶电泳

毛细管等电聚焦

胶束电动毛细管色谱等

(4)应用:广泛应用于药物分析、DNA测序、手性分子分离、临床检测等。

3、芯片电泳

在微流控芯片通道中进行电泳,实现快速、高通量、集成化的“芯片实验室”分析。


四、按应用目标分类

1、核酸电泳

(1)主要用于DNA/RNA的片段大小分析、纯度检测、Southern/Northern blotting前期分离等。

(2)常用介质:琼脂糖凝胶(常规分析)、PAGE(小片段高分辨分析)。

2、蛋白质电泳

(1)用于蛋白质分子量测定、纯度分析、表达比较、Western blotting前期分离等。

(2)常用技术:SDS-PAGE、非变性PAGE、等电聚焦、双向电泳。

3、细胞/颗粒电泳

如细胞电泳,用于研究细胞表面电荷。


五、总结与选购指南

1、琼脂糖凝胶电泳

支持介质:琼脂糖

典型应用:核酸片段分离、鉴定

特点:操作简单,适合大片段核酸

2、SDS-PAGE

支持介质:聚丙烯酰胺凝胶 + SDS

典型应用:蛋白质分子量测定、纯度分析

特点:高分辨率,基于分子量分离变性蛋白质

3、非变性PAGE

支持介质:聚丙烯酰胺凝胶(无SDS)

典型应用:天然蛋白质、活性复合物分析

特点:保持生物活性

4、等电聚焦

支持介质:两性电解质形成pH梯度

典型应用:蛋白质等电点分析、纯化

特点:高分辨率,基于电荷分离

5、双向电泳

支持介质:IEF + SDS-PAGE

典型应用:复杂蛋白质组分析

特点:分辨率高,可分离数千种蛋白质

6、毛细管电泳

支持介质:毛细管 + 多种分离模式

典型应用:高效快速分析DNA、蛋白质、小分子

特点:自动化、微量、快速、高效


选择哪种电泳技术,主要取决于:

分析对象:核酸、蛋白质还是其他分子?

分辨率要求:是常规检查还是高精度分析?

下游应用:是否需要回收、 blotting 或质谱鉴定?

样本量与通量:是高通量筛查还是少量样本精细分析?


电泳技术是现代分子生物学、生物化学和临床诊断的基础工具,理解其分类有助于根据实验目的选择Z合适的方法。

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