该仪器是一款紧凑型、操作简便的电穿孔仪，适用于细菌、酵母及哺乳动物细胞的电转染。其核心特点是预设了针对常见细胞类型的优化程序，同时也支持用户自定义参数。

一、伯乐MicroPulser电穿孔仪标准操作规程

1、目的

规范伯乐MicroPulser电穿孔仪的标准化操作与日常维护，确保电转染实验的重现性、高效性，保障操作人员安全，并延长仪器使用寿命。

2、适用范围

适用于使用伯乐MicroPulser电穿孔仪进行微生物（如大肠杆菌）或哺乳动物细胞的电转化/电转染实验。

3、安全注意事项

（1）高压警告：仪器工作时产生高达2500V的高压脉冲。严禁在电击时打开样品槽盖或触碰电极。仅在仪器“Ready”指示灯亮起且蜂鸣器提示结束后，方可开盖。

（2）个人防护：操作时应佩戴绝缘手套。处理生物样品时，需同时佩戴实验手套。

（3）环境安全：保持工作区及仪器表面干燥。避免缓冲液或样品溅洒到电极或样品槽内。

（4）专用耗材：必须使用一次性无菌电击杯。禁止重复使用，以防交叉污染和电弧放电。

（5）样品要求：电击杯中的样品体积必须准确（通常为40-200µl，常用100µl），且液体不能溅到杯壁外侧，确保电极接触良好。

4、操作前准备

A、仪器准备：

（1）确认电源线连接牢固。

（2）打开仪器背面电源开关。

（3）仪器自检，屏幕点亮，进入主界面。

B、耗材与试剂准备：

（1）电击杯：从包装中取出所需数量的1mm或2mm间隙（根据细胞类型选择）的一次性无菌电击杯，置于冰上预冷（对温度的细胞）。

（2）细胞与DNA：制备处于对数生长期、经洗涤并重悬于低电导率缓冲液（如冰冷无菌水或特定电转缓冲液）中的感受态细胞/待转染细胞。将DNA与细胞悬液轻柔混匀。

（3）回收培养基：准备好预热的富含SOC/LB（细菌）或培养基（哺乳动物细胞）的回收管。

C、程序选择：

（1）预设程序：按 Pgrm 键，使用旋钮选择对应的预设程序（例如：Ec1 用于大肠杆菌，Sc 用于酿酒酵母，AHC 用于动物细胞高电容模式等）。

（2）自定义程序：按 User Pgrm 键，可手动设定电压 (V)、电容 (µF) 和电阻 (Ω) 参数。

二、伯乐MicroPulser电穿孔仪标准操作流程

1、步骤一：参数加载与确认、

（1）选择或设定好程序后，屏幕会显示相应的电压、电容、电阻和时间常数（由仪器计算）。

（2）仔细核对参数是否与实验方案一致。

2、步骤二：加样与电击

（1）用移液器将 DNA-细胞混合悬液（通常为40-100µl）轻柔、（2）快速地加入预冷的电击杯中，避免产生气泡。

（3）用吸水纸擦干电击杯外壁，确保无液体残留。

（4）平稳、快速地将电击杯滑入样品槽，确保其底部与电极紧密接触，听到/感到“咔哒”声。

（5）关闭样品槽盖。

（6）同时按下仪器面板上的两个脉冲触发按钮（位于左右两侧，需双手操作，此为安全设计）。

（7）仪器发出蜂鸣声，电击瞬间完成。屏幕显示实际施加的电压和时间常数（Time Constant）。记录此时间常数，它是评估电击效率的重要指标（通常5-20ms为佳）。

3、步骤三：样品回收

（1）电击结束后，仪器再次发出蜂鸣提示。此时“Ready”灯亮起。

（2）打开样品槽盖，取出电击杯。

（3）立即向电击杯中加入0.5-1 ml预热的回收培养基（或直接将其全部转移至含回收培养基的试管中）。

（4）用移液器轻轻吹吸数次，将细胞温和、重悬。

（5）将细胞悬液转移至合适的培养容器中，在适宜条件下进行复苏培养。

4、步骤四：结束实验

（1）弃用过的电击杯至生物危害垃圾桶。

（2）如果后续无人使用，关闭仪器背面电源开关。

（3）清洁工作区域。

三、日常与定期维护流程

1、每次使用后：

（1）检查并清洁电极：用蘸有70%乙醇的无尘棉签或镜头纸轻轻擦拭样品槽内的两个金属电极触点，去除可能存在的盐结晶或样品残留。待其风干后盖上样品槽盖。

（2）保持清洁：用湿布擦拭仪器外壳。

2、每周/每月：

（1）检查样品槽内部是否有顽固污渍。如有，可用棉签蘸取温和清洁剂（如稀释的实验室清洁剂）清洁，再用乙醇棉签擦拭，确保风干。

（2）检查电源线和插头是否完好。

3、注意事项：

（1）严禁向样品槽内直接倾倒任何液体。

（2）严禁使用腐蚀性、强酸强碱或丙酮类溶剂清洁电极。

（3）仪器长期不使用时，应拔下电源插头，并用防尘罩覆盖。

四、故障排除

1、仪器无反应/不启动：检查电源连接和背面开关。

2、无法触发脉冲（按下按钮无反应）：

（1）确认样品槽盖已关闭。

（2）确认电击杯已正确、紧密地放置到位。

（3）确认是否同时按下了两个触发按钮。

3、电弧（听到“啪”的爆裂声，时间常数极短）：

（1）常见原因：电击杯内样品体积不正确、有气泡、或含有高盐分。

（2）电击杯重复使用或外壁不洁。

（3）细胞悬液中有杂质或过浓。

（4）应对：丢弃该样品，使用新的电击杯并重新制备低电导率的细胞悬液。

4、时间常数过短：通常与上述导致电弧的原因相同，或预设电压过高。

5、时间常数过长：细胞悬液电导率可能过低，或电容/电阻设置不匹配。