伯乐Gene Pulser Xcell真核细胞电穿孔系统的标准化操作指南，适用于哺乳动物、植物、真菌等真核细胞的电转染实验。请严格遵循生物安全与仪器操作规范：

一、 伯乐Gene Pulser Xcell真核细胞电穿孔系统实验前准备

A、仪器与耗材

1、Gene Pulser Xcell主机、电转杯槽、电转杯（建议使用预冷4℃的0.4 cm或0.2 cm间隙电转杯）

2、电转缓冲液（如预冷的PBS、HBSS或无血清培养基，低离子强度可减少电弧风险）

3、目标核酸（质粒DNA、siRNA等，需高纯度、无菌，溶于低盐缓冲液如TE）

4、冰浴容器、计时器、移液器及无菌吸头

B、参数设定

参考常见真核细胞参数范围（需根据细胞类型优化）

1、电压：100-500 V（哺乳动物细胞常用200-300 V）

2、电容：500-1000 μF（高电容适用于较大细胞）

3、脉冲次数：1-2次

4、脉冲间隔：≥1 s（若为双脉冲）

5、波形：选择指数衰减波（Exponential Decay）

二、伯乐Gene Pulser Xcell真核细胞电穿孔系统操作步骤

1、系统启动

连接电源，打开主机开关，系统自检后进入主界面。

2、程序设置

（1）按下"Protocol"键，选择Exponential模式。

（2）输入目标参数（参考优化后的电压、电容、脉冲数）。

（3）保存程序（可选）以备重复使用。

3、样本准备

（1）细胞洗涤：用预冷电转缓冲液洗涤细胞2次，重悬至目标密度。

（2）混合样本：将细胞悬液与核酸轻柔混合。

（3）保持样本全程冰浴（降低细胞代谢，提高存活率）。

4、电转操作

（1）将混合液转移至预冷的电转杯中（避免气泡，气泡会导致电弧）。

（2）擦干电转杯外壁水渍，放入电转槽（注意正负极方向）。

（3）按下"Pulse"键，观察脉冲放电（伴随蜂鸣声）。

（4）屏幕显示实际电压与脉冲时间，记录实际时间常数（τ）。

5、细胞复苏

（1）电击后立即将细胞转入预热的培养基中。

（2）轻柔吹打混匀，转移至培养皿，放入37℃ CO?培养箱。

（3）根据实验目的，在24-72小时后检测转染效率。

三、关键参数优化建议

1、电压与电容平衡：

（1）高电压+低电容 → 适合小细胞（如淋巴细胞）

（2）低电压+高电容 → 适合大细胞（如成纤维细胞）

2、时间常数（τ）评估：

（1）τ < 5 ms：可能电压过高或缓冲液离子强度过低

（2）τ > 30 ms：可能电容过高或细胞密度过大

3、细胞状态控制：

（1）使用低传代次数细胞（< P20）

（2）电转前血清饥饿处理可能提高某些细胞系的转染效率。

四、安全与注意事项

1、电弧预防：

（1）确保电转杯外壁干燥、无裂痕

（2）避免缓冲液离子浓度过高（推荐使用低电导缓冲液）

（3）核酸样本避免含酚、乙醇等残留

2、生物安全：

（1）电转后废弃物需按生物危害材料处理

（2）实验台面用70%乙醇擦拭，防止核酸污染

3、仪器维护：

（1）定期用乙醇清洁电转槽

（2）长时间不用时断开电源

五、常见问题排查

1、细胞存活率低

可能原因：电压过高/缓冲液不适

解决方案：降低电压，更换缓冲液优化

2、转染效率低

可能原因：核酸纯度不足/细胞状态差

解决方案：重新纯化核酸，使用新鲜细胞

3、电弧现象

可能原因：电转杯有气泡或裂痕

解决方案：轻柔混合，更换新电转杯

4、仪器无脉冲输出

可能原因：程序设置错误/电容未充电

解决方案：检查参数设置，重启仪器