伯乐1658003（通常指Mini-PROTEAN Tetra Cell系列）是实验室常用的垂直电泳槽。根据官网标准操作流程为你整理了完整、可直接使用的详细步骤。

一、伯乐1658003 小型垂直电泳槽标准操作流程

1、准备工作

耗材与试剂：

制胶玻璃板（1.0mm或1.5mm厚，短板+带边条的短板/长板）

配套的梳子（1.0mm或1.5mm，10孔/15孔）

制胶架、制胶底座、海绵垫（通常在制胶架上）

电泳缓冲液（Tris-Glycine SDS Running Buffer，即TGS）

蛋白样品、预染Marker、上样缓冲液

电泳仪电源

二、伯乐1658003 小型垂直电泳槽制胶步骤

1、清洗与组装玻璃板

（1）清洗： 用洗洁精清洗玻璃板，尤其是带边条的短板（与胶接触面），自来水冲净后，用蒸馏水润洗。自然晾干或用无屑纸巾擦干，确保无残留胶渍和水渍。

（2）组装：

将长板（无磨砂边）平放在桌面上。

将短板（有磨砂边/带边条）对齐叠放在长板上（底部和两侧对齐）。

将对齐的玻璃板放入制胶夹中（绿色夹子，通常有左右之分），玻璃板的底边必须水平且卡在夹子的底部胶条上。

用力捏紧制胶夹，将其垂直安插在制胶架上。

2、配制分离胶与灌胶

（1）根据目标蛋白大小配制相应浓度的分离胶（下层胶），Z后加入TEMED并迅速混匀。

（2）用移液枪或滴管吸取分离胶，从玻璃板一侧边缘缓慢注入，避免产生气泡。

（3）灌至绿色制胶夹下沿（或距短板上沿约1.5-2cm处）。

（4）在胶面上轻轻加入一层水、乙醇或异丙醇压平液面并隔绝空气。

（5）静置约20-30分钟，直至凝胶与水层之间出现一条清晰的折光线，倒掉上层液体，用滤纸条吸干残留水分。

3、配制浓缩胶与插梳子

（1）配制浓缩胶（上层胶），混匀后立即灌满玻璃板剩余空间。

（2）将梳子水平插入浓缩胶中，从一侧向另一侧倾斜插入，避免产生气泡。

（3）静置约15-20分钟，等待浓缩胶凝固。凝固后可立即使用，或用湿润纸巾包裹后放入4℃冰箱保存。

三、 电泳步骤

1、组装电泳芯与内槽

（1）取下制胶架上的玻璃板，将其从制胶夹上取下，冲洗掉多余的残胶。

（2）准备电极芯： 将两块凝胶玻璃板（短板朝内）安装在电极芯两侧。

（3）如果是只跑一块胶，电极芯的另一侧需要用缓冲液挡板（白色塑料板）代替，确保密封。

（4）扣紧： 将电极芯两侧的夹子扣紧，夹住玻璃板和挡板。

（5）内槽检漏与加液： 将组装好的电极芯放入电泳槽中。向两块玻璃板之间的内槽（电极芯内部）倒入新鲜的电泳缓冲液，倒满至溢出。静置1分钟观察液面是否明显下降（漏液）。如不漏，必须将内槽加满。

2、上样

（1）轻轻垂直拔出梳子。

（2）用电泳缓冲液冲洗加样孔，去除未聚合的凝胶碎片。

（3）上样： 用微量进样器或枪头上样。将枪头插入加样孔底部，轻轻打出样品。缓慢打出，防止样品冲出孔外。记录上样顺序。

3、连接电源

（1）在外槽（电泳槽主体）中倒入电泳缓冲液，液面至少淹没底部金属丝。

（2）盖上盖子（黑对黑，红对红）。

（3）连接电源：正极（红）接红，负极（黑）接黑。

（4）设置参数：

浓缩胶： 恒压 80V，约20-30分钟（样品跑成一条细线并进入分离胶）。

分离胶： 恒压 120-150V，约40-60分钟。

（5）电泳至溴酚蓝（蓝色染料）到达玻璃板底部边缘时，停止电泳。

四、 拆胶与后续

1、断电： 先关电源，拔掉电源线，取下盖子。

2、倒液： 倒掉电泳缓冲液。

3、取板： 取出电极芯，打开夹子，取出玻璃板。

4、撬胶： 使用撬胶板（塑料刮片）在玻璃板一侧轻轻撬开。通常长板较易分离。切掉浓缩胶，将分离胶小心剥下放入染色液中进行后续考马斯亮蓝染色或转膜操作。

五、 常见问题与排查

1、漏胶：

（1）原因1：玻璃板底部未对齐。

（2）原因2：制胶架底部的海绵垫老化变硬。解决方案： 取少量1%琼脂糖凝胶融化后，在玻璃板底部四周封边。

2、电泳时条带呈“微笑”或“皱眉”：

（1）微笑（两边慢中间快）： 通常是凝胶温度过高，建议降低电压或在冰浴中进行。

（2）皱眉（两边快中间慢）： 通常是内槽缓冲液泄漏导致液面低于短板。这是1658003常见的错误！ 务必保证内槽液面是满的，外槽液面只需没过电极丝即可，不要加得太满导致内外压力不平衡。

3、跑得极慢：

检查缓冲液是否误配成非SDS的缓冲液（如TAE/TBE，那是核酸电泳用的），或缓冲液过度稀释。